计算退火温度的方法：

1.退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）只是粗算,有时不灵,但比较简便.

2.用primer5（oroligo6）计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2or3度最好.

3.合成引物的单子上也有个Tm,减去5～8也可,但有些公司提供的Tm就是方法1计算的.

我认为方法二最准确,不知道还有其他方法吗?